Краткое описание

Работа посвящена определению диапазона рабочих условий протеазы Ulp1 для гидролиза SUMO-гибридных белков. Исследовано влияние pH, температуры, времени инкубации, концентраций NaCl, мочевины, L-аргинина, L-цистеина, 2-меркаптоэтанола и Tween-20 на активность фермента. Для каждого параметра установлены оптимальные и допустимые значения. Предложен состав буферного раствора, обеспечивающий максимальную активность Ulp1 и совместимый с условиями, предотвращающими агрегацию целевых белков.

Решаемая в ВКР проблема

Отсутствие систематических данных о толерантности протеазы Ulp1 к вариациям буферного состава, что создает разрыв между теоретической эффективностью SUMO-технологии и ее практической применимостью для очистки рекомбинантных белков, склонных к агрегации.

Выводы

• Выявлены ключевые параметры буферного раствора, влияющие на активность Ulp1: pH, ионная сила, присутствие мочевины, L-аргинина, L-цистеина, 2-меркаптоэтанола и детергента Tween-20.
• Для каждого параметра определены диапазоны, в которых активность фермента сохраняется на уровне не менее 50%.
• На основании полученных данных предложен состав буферной системы, обеспечивающий максимальную активность Ulp1 и предотвращающий агрегацию целевых белков.